Del Test ELISA è un esame di laboratorio medico che si traduce in una cosiddetta reazione antigene-anticorpo. È possibile testare diversi antigeni che svolgono un ruolo nella medicina umana o veterinaria. In Germania, solo gli istituti di laboratorio accreditati sono incaricati di eseguire il test.
Cos'è la procedura?
ELISA è l'abbreviazione di Saggio immunoassorbente legato agli enzimi. È quindi un nome in lingua inglese, ma si è affermato nell'uso medico tedesco.
Il test ELISA è uno dei cosiddetti metodi immunologici all'interno dei test di laboratorio medico. La procedura di test può essere utilizzata per rilevare molecole proteiche in un'ampia varietà di fluidi corporei. Il rilevamento di queste molecole a sua volta consente di trarre conclusioni su determinate malattie o quadri clinici, motivo per cui i medici dipendono anche la loro diagnosi dal risultato di tale test ELISA. La procedura del test è quindi molto importante nella pratica clinica quotidiana, ambulatoriale o ospedaliera.
I fluidi corporei corrispondenti, ad esempio sangue intero o fluidi dalle articolazioni, vengono inviati direttamente al laboratorio dopo essere stati prelevati dal paziente. I campioni sono generalmente molto urgenti, perché il materiale nativo è considerato sensibile e dovrebbe essere esaminato il prima possibile. I cosiddetti campioni sovrapposti possono portare a risultati falsi negativi perché le proteine patologiche da rilevare sono state nel frattempo ridotte o completamente scomposte. La cosiddetta pre-analisi gioca un ruolo importante nell'ELISA; i risultati sospetti o negativi dovrebbero essere ripetuti di nuovo se ci sono sintomi clinici.
Funzione, effetto e obiettivi
Le provette e le cosiddette piastre per microtitolazione sono essenziali per un corretto test in un laboratorio medico accreditato. Queste piastre con piccole rientranze semi-concave sono realizzate in plastica speciale e sono rivestite ciascuna con un anticorpo molto specifico.
Se l'antigene da rilevare è presente in un fluido corporeo da esaminare, si verifica una specifica reazione antigene-anticorpo secondo il cosiddetto principio lock and key. Il personale di laboratorio può inserire il materiale del campione nelle piastre manualmente utilizzando pipette o in modo completamente automatico. Nei moderni istituti di laboratorio medico vengono utilizzati solo sistemi completamente automatizzati per eseguire la diagnostica ELISA.
Tuttavia, questi devono essere monitorati da personale addestrato, assistenti di laboratorio medico-tecnico. Il cosiddetto controllo di qualità interno ed esterno è anche di competenza del personale di laboratorio, preposto al personale medico per la medicina di laboratorio, l'epidemiologia delle infezioni e la microbiologia. Dopo il primo tentativo, cioè dopo che il materiale è stato pipettato sulle piastre, gli antigeni specifici nel campione, se presenti, si sono già legati agli anticorpi sulla piastra di plastica.
Segue un ciclo di lavaggio con soluzione salina fisiologica per rimuovere dal lotto fattori di disturbo come antigeni o proteine indesiderati. Questo passaggio è molto importante per evitare reazioni false positive. Un risultato apparentemente positivo interpretato male dal laboratorio può in determinate circostanze avere conseguenze fatali per un paziente. Nella seconda fase dell'indagine, viene aggiunto un ulteriore anticorpo, che è legato a un enzima. Questo anticorpo marcato si lega anche all'antigene.
In una terza e ultima fase, viene aggiunto un colorante speciale in una quantità definita, che viene scomposta in misura maggiore o minore dai residui enzimatici rimanenti. Può essere scomposto solo quell'enzima che non è stato precedentemente legato all'antigene insieme all'anticorpo. L'enzima libero è in grado di scindere il colorante aggiunto. La quantità esatta del colorante diviso può essere determinata con un ulteriore metodo di laboratorio medico, la cosiddetta fotometria. Ciò consente di trarre una conclusione esatta in merito alla presenza e alla quantità di antigene in un materiale campione.
Il test ELISA non viene utilizzato solo per la diagnosi iniziale o per convalidare diagnosi sospette in determinate malattie e quadri clinici, ma anche per monitorarne i progressi. Se la concentrazione dell'antigene nel test si riduce nel corso della terapia, la terapia è considerata riuscita.
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Il test ELISA è particolarmente informativo attraverso la rilevazione di strutture antigeniche nei fluidi corporei. Il test consente un'affermazione cosiddetta qualitativa, ma anche semiquantitativa e quantitativa circa la presunta presenza di alcuni antigeni nei fluidi corporei.
Non è possibile utilizzare sangue intero per l'esame, ma solo siero di sangue. Un test diretto sul paziente, ad esempio dal sangue capillare del polpastrello, è quindi, come per alcuni altri test sierologici, non possibile fino ad oggi. Nella medicina umana, il test ELISA viene utilizzato principalmente per rilevare gli antigeni nelle infezioni batteriche, virali o fungine. Inoltre, tutti i risultati positivi della sierologia dell'epatite vengono nuovamente controllati con un test ELISA come standard.
Alcuni ormoni, come l'ormone della gravidanza HCG, possono anche essere determinati con il test ELISA. Se durante la gravidanza si verificano determinate complicazioni, una conoscenza precisa della concentrazione dell'ormone della gravidanza nel sangue è molto utile dal punto di vista diagnostico e terapeutico. Un'altra area di indicazione per il test è la rilevazione delle cosiddette paraproteine nelle urine, poiché si verificano, ad esempio, in varie malattie tumorali come il mieloma multiplo.
Il test ELISA viene ancora eseguito in molti istituti di laboratorio oggi, ma è considerato obsoleto dagli esperti. La reazione immunitaria legata all'enzima nel test ELISA è stata sempre più sostituita negli ultimi anni da anticorpi marcati radioattivamente che forniscono risultati quantitativi ancora migliori. Questi test sono noti anche come RIA, Radio Immunoassorbent Assay. Ulteriori sviluppi ulteriori specifici dell'ELISA sono metodi chimici leggeri come la luminescenza o la fluorescenza.
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