Rilevazione diretta dell'immunofluorescenza

Le prove di strutture tissutali, anticorpi e agenti patogeni attraverso l'etichettatura immunitaria sono popolari, moderne e accurate. L'immunofluorescenza si riferisce all'etichettatura immunitaria con anticorpi fluorescenti preparati che sono fatti per brillare alla luce UV.

Al Rilevazione diretta dell'immunofluorescenza il substrato viene esaminato direttamente con anticorpi luminosi, senza anticorpi primari o antigeni artificiali.

Cos'è il rilevamento dell'immunofluorescenza diretta?

La rilevazione diretta dell'immunofluorescenza è un metodo diagnostico basato sulla conoscenza di immunologia, immunocolorazione e immunoistochimica. L'attenzione qui è sulla capacità degli anticorpi di legarsi a punti specifici nel tessuto o agli antigeni in un siero. Questi luoghi sono epitopi.

Nella diagnostica biochimica ci sono anticorpi artificiali o mimetici (singolare: mimetico) che consentono a questi legami anticorpo-antigene di essere contrassegnati dalla fluorescenza o dalla radioattività. I coniugati di anticorpi artificiali si legano da un lato agli epitopi e dall'altro hanno un marker fluorescente in caso di immunofluorescenza. Questa è un'alternativa all'uso di marcatori radioattivi. La particolarità della rilevazione diretta dell'immunofluorescenza rispetto alla rilevazione indiretta è che l'anticorpo che si lega all'epitopo dell'antigene nel materiale esaminato rappresenta anche l'anticorpo coniugato con il marker fluorescente. Non sono necessari anticorpi aggiuntivi per il rilevamento diretto.

La fluoresceina, che brilla sotto la luce UV, e l'isotiocianato di fluoresceina (FITC) sono usati come coloranti per produrre coniugati di anticorpi artificiali in immunofluorescenza. Finora sembra un po 'complicato, ma il rilevamento diretto dell'immunofluorescenza è un metodo diagnostico di laboratorio medico standard per un'ampia varietà di domande mediche. Gli anticorpi con il colorante fluorescente sono pronti per la vendita.

Funzione, effetto e obiettivi

Il rilevamento diretto dell'immunofluorescenza è disponibile per gli esami dei tessuti per la colorazione di determinate strutture nel tessuto. Ma sono disponibili anche per celle singole. La citometria a flusso gioca un ruolo importante qui. Infine, ci sono i test immunologici in fase solida e liquida. Gli esami di immunofluorescenza dei tessuti sono particolarmente importanti in oncologia, cioè il trattamento medico delle malattie del cancro.

Gli antigeni tumorali specifici nel tessuto tumorale possono essere rilevati direttamente con l'immunofluorescenza. Questi esami su campioni di tessuto da tumori sono spesso importanti per scoprire da dove provenissero le metastasi esistenti nel corpo, o per giudicare se un tumore è benigno o maligno. L'esame di singole cellule con rilevazione di immunofluorescenza diretta viene utilizzato per trovare antigeni virali, antigeni batterici e altri epitopi.

Ad esempio, puoi scoprire se le cellule sono state infettate da un virus e in quale fase del ciclo di infezione si trovano le cellule. Il nome FACS (= Fluorescence-Activated Cell Sorting) è un metodo di citometria a flusso altamente efficiente in cui le cellule contrassegnate con fluorescenza vengono distribuite a diverse provette a seconda del tipo di colore. Questa procedura è importante in immunologia, ematologia e malattie infettive.

I dosaggi immunofluorescenti consentono la rilevazione diretta di tossine ambientali, organismi geneticamente modificati e alcuni additivi negli alimenti. In questa configurazione sperimentale c'è sempre una fase solida e una liquida. Anche numerosi agenti patogeni, compreso il virus HIV che causa l'AIDS, potrebbero essere rilevati direttamente. Quando si rilevano malattie infettive e autoimmuni, tuttavia, spesso si tratta di rilevare gli anticorpi piuttosto che gli antigeni. Queste sono le molecole di difesa formate dal sistema immunitario del corpo. Secondo la definizione qui presentata, tali prove non sono prove dirette, poiché gli anticorpi fluorescenti non si accoppiano direttamente agli antigeni del corpo, ma agli antigeni della disposizione del test.

Questi antigeni nella configurazione sperimentale sono a loro volta collegati agli anticorpi del corpo. Il rilevamento diretto dell'immunofluorescenza per infezioni comuni, ad esempio virus HIV e clamidia, viene utilizzato solo in test speciali di rilevamento e conferma. Ci sono test per molte altre malattie. Nella maggior parte delle situazioni, il rilevamento indiretto degli anticorpi è più adatto per le malattie infettive, poiché il sistema immunitario del corpo ha un'ingegnosa capacità di ricordare infezioni precedenti. In altre situazioni, il rilevamento diretto degli antigeni e il rilevamento indiretto degli anticorpi si completano a vicenda. I secondi mostrano che si è verificata un'infezione in precedenza, mentre i primi forniscono informazioni più precise sullo stato attuale dell'attività del patogeno.

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Rischi, effetti collaterali e pericoli

Con il rilevamento dell'immunofluorescenza diretta, come per tutte le prove mediche, ci sono due rischi: il rischio di un risultato falso e positivo e il rischio di un risultato falso e negativo. Risultati falsi e positivi causano disagio psicologico e grande stress per il paziente.

Pertanto, ulteriori procedure di test vengono aggiunte ai risultati positivi, soprattutto se la diagnosi porta a drastici cambiamenti nella vita. Il rischio di un risultato falso e negativo è che il paziente non venga a conoscenza della minaccia per la propria salute e forse anche per la salute pubblica in tempo utile. Pertanto, è bene fare molte ricerche e realizzare e offrire un gran numero di diversi rilevamenti diretti di immunofluorescenza pronti per la vendita. Insieme ad altri metodi di rilevamento diretto e indiretto di malattie e patologie, ciò aumenta l'accuratezza della diagnosi.

La rilevazione diretta si basa sul coniugato anticorpale, che da un lato si lega agli epitopi degli antigeni e dall'altro provoca anche la fluorescenza. Un tale prodotto viene quindi utilizzato solo in un tipo di procedura di prova e non viene utilizzato per altri tipi di procedura di prova.Questa è un'importante differenza procedurale rispetto all'evidenza indiretta, in cui gli anticorpi fluorescenti sono preceduti da anticorpi primari per il legame dell'epitopo. Il coniugato dell'anticorpo è quindi adatto a diversi test. Questa differenza procedurale è diversa dalla differenza medica tra la rilevazione indiretta di anticorpi e la rilevazione diretta di antigeni.